PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Guimarães F.F., Joaquim S.F., Manzi M.P., Silva R.C., Bruder-Nascimento A.C.M.O., Costa E.O. & Langoni H. 2016. Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1160-1164. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Jr s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearson’s correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and in relation to 150 CPS isolates it was detected an agreement of 98.7%, kappa = 0.960, SE of kappa = 0.016, (95% confidence interval: 0.929 to 0.992) Pearson’s correlation coefficient (r) = 0.9994 (95% confidence interval: 0.9681 to 1.0000). The verified agreement strength between the identification methods can be considered as excellent. These results assure that according to laboratory resources any of them will be suitable to perform the staphylococci identification.

• Phenotype genotype Staphylococcus spp. mastitis fenotipo genótipo mastite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Guimarães F.F., Joaquim S.F., Manzi M.P., Silva R.C., Bruder-Nascimento A.C.M.O., Costa E.O. & Langoni H. 2016. Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis. [Comparação da identificação fenotípica e genotípica de espécies do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1160-1164. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Jr s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de kappa = 0,021 (95% intervalo de confiança: 0,893-0,974), coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9977, (intervalo de confiança de 95%: 0,9938 a 0,9992) e em relação a 150 SCP isolados foi observado uma concordância de 98,7%, kappa = 0,960, sE de kappa = 0,016, (95% de intervalo de confiança: 0,929 a 0,992) coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9994 (95% intervalo de confiança: 0,9681-1,0000). A correlação entre os métodos de identificação pode ser considerada como excelente. Esses resultados demonstraram que de acordo com os recursos disponíveis no laboratório, poderia ser utilizada qualquer uma das metodologias.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Langoni H., Guimarães F.F., Costa E.O., Joaquim S.F. & Menozzi B.D. 2015. [Milk cellularity and colony forming units in mastitis caused by coagulase-positive staphylococci and coagulase negative.] Celularidade do leite e Unidades Formadoras de Colônias nas mastites causadas por Staphylococcus coagulase positiva e coagulase negativa. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(6):518-524. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Junior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br Mastitis is the main affection of cattle intended for dairy production, which significantly impacts the milk production chain, with consequences yet to public health. It was studied aspects related to etiology, cellularity and bacterial count in 10 dairy farms, in the State of São Paulo. There were examined 1148 milking cows, totaling 4584 mammary glands. Cases in which there was isolation coagulase positive staphylococci (CPS) and coagulase-negative staphylococci (CNS) were considered. The results showed microbiota with various different pathogens and CNS (128 cases) and CPS (45), Staphylococcus aureus (90), Streptococcus agalactiae (70), Streptococcus dysgalactiae (69), Streptococcus uberis (29), Corynebacterium spp . (230), Klebsiella pneumoniae (28), Klebsiella oxytoca (2), Escherichia coli (15), Enterobacter spp. (3). The somatic cell count (SCC) related to CPS and CNS showed no differences among the evaluated properties, although with significant differences when evaluating the SCC between both groups of staphylococci, as evidenced by comparing discreet CNS and exuberant CPS (P <0.01), discreet CPS and exuberant CPS (P <0.001) and moderate SCN and exuberant SCP (P <0.01). The evaluation of SCC was related to the intensity of infection, considering how slight growth isolation of up to nine colonies, moderate ten to 29 colonies and lush, with 30 or more colonies, revealed for both groups of staphylococci that the higher the number of colony forming units (CFU), SCC is higher being larger in cases of CPS. The results indicate that the importance of both CPS and CNS when considering the high occurrence of the evaluated properties and the fact that it raises the SCC, which compromises the quality of milk. We conclude that when there is a larger number of CFU, is concomitantly higher SCC/ml of milk, in the case of CPS and CNS, which shows a direct relationship of the intensity of the infectious process with the response of milk cellularity, as well as the relevance of these in the etiology of mastitis and negatives aspects to both the production and the quality of milk produced in properties.

• Milk quality staphylococci leite estafilococos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Langoni H., Guimarães F.F., Costa E.O., Joaquim S.F. & Menozzi B.D. 2015. [Milk cellularity and colony forming units in mastitis caused by coagulase-positive staphylococci and coagulase negative.] Celularidade do leite e Unidades Formadoras de Colônias nas mastites causadas por Staphylococcus coagulase positiva e coagulase negativa. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(6):518-524. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Junior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br A mastite é a principal afecção do gado destinado à produção leiteira, que impacta significativamente a cadeia produtiva do leite, com reflexos ainda para a saúde pública. Estudou-se aspectos relacionados à etiologia, celularidade e de contagem bacteriana em 10 propriedades leiteiras, localizadas no Estado de São Paulo. Foram examinadas 1148 vacas em lactação, totalizando 4584 glândulas mamárias. Foram considerados os casos, em que houve isolamento de estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase negativa (SCN). Os resultados revelaram microbiota com vários patógenos e diferentes espécies de SCN (128 casos) e SCP (45), Staphylococcus aureus (90), Streptococcus agalactiae (70), Streptococcus dysgalactiae (69), Streptococcus uberis (29), Corynebacterium spp. (230), Klebsiella pneumoniae (28), Klebsiella oxytoca (2), Escherichia coli (15), Enterobacter sp. (3). Os resultados de contagem de células somáticas (CCS) relacionados aos SCP e SCN não mostraram diferenças entre as propriedades avaliadas, entretanto com diferenças significantes ao se avaliar a CCS entre os dois grupos de estafilococos, como pode ser evidenciado ao comparar SCN Discreto e SCP exuberante (P<0,01), SCP Discreto e SCP exuberante (P<0,001) e SCN moderado e SCP exuberante (P<0,01). A avaliação da CCS relacionada à intensidade da infecção, considerando-se como crescimento discreto o isolamento de até nove colônias, moderado de dez a 29 colônias e exuberante, com 30 ou mais colônias, revelou para ambos os grupos de estafilococos que quanto maior o número de unidades formadoras de colônias (UFC), a CCS é mais elevada, sendo sempre maior nos casos de SCP. Conclui-se que quando há maior número de UFC, há concomitantemente maior CCS/mL de leite, no caso dos SCP e SCN, o que mostra relação direta da intensidade do processo infeccioso com a resposta da celularidade do leite, bem como pela relevância desses na etiologia das mastites e dos aspectos negativos tanto para a produção, quanto na qualidade do leite produzido nas propriedades.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Arcaro J.R.P., Matarazzo S.V., Pozzi C.R., Arcaro Junior I., Toledo L.M., Costa E.O. & Miranda M.S. 2013. Effects of environmental modification on mastitis occurrence and hormonal changes in Holstein cows. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(6):826-830. Departamento de Ciências Agrárias e Ambientais, Universidade Estadual de Santa Cruz, Rodovia Jorge Amado Km 16, Ilhéus, BA, 45662-900 Brazil. E-mail: svmatarazzo@uesc.br The purpose of this research was to evaluate the effects of evaporative cooling in freestall on mastitis occurrence, milk production, and composition, as well as cortisol, T3 (triiodothyronine), and T4 (thyroxin) levels in lactating dairy cows. Twenty-eight multiparous cows averaging 70 ± 10 day postpartum were used in four treatments from January to March 2003. The treatments were: Day (cooling from 7:00 a.m. to 7:00 p.m.); Night (cooling from 7:00 p.m. to 7:00 a.m.); 24-hour (cooling 24-hour); and Control (no cooling). Wired cup test was used for clinical mastitis diagnosis, and the California Mastitis Test (CMT) was used to identify subclinical mastitis. Blood and milk samples were taken weekly for microbiological and hormonal analyses. The cortisol levels were higher than normal values in all treatment groups, suggesting stress conditions, but T3 and T4 levels remained normal in all groups. The occurrence of subclinical mastitis was lower in Day and Night groups than in Control and 24-hour groups. Regarding the microbiological analyses, in all groups the isolation of Corynebacterium sp. from milk samples increased while negative coagulase staphylococci (CNS) declined as etiological agents of subclinical mastitis. However, in Day and 24-hour groups, coagulase positive staphylococci (CPS) increased mainly Staphylococcus aureus (49.8% and 47.7% respectively). The Night group showed a decrease in subclinical mastitis occurrences. Our data indicate that all animals subjected to treatments presented high levels of cortisol, indicating a stress condition. The Night treatment presented a reduction in microbial isolation, suggesting a reduced susceptibility to mastitis.

• Mastitis mastite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Arcaro J.R.P., Matarazzo S.V., Pozzi C.R., Arcaro Junior I., Toledo L.M., Costa E.O. & Miranda M.S. 2013. Effects of environmental modification on mastitis occurrence and hormonal changes in Holstein cows. [Efeito da modificação ambiental sobre a ocorrência de mastite e alterações hormonais de vacas Holandesas.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(6):826-830. Departamento de Ciências Agrárias e Ambientais, Universidade Estadual de Santa Cruz, Rodovia Jorge Amado Km 16, Ilhéus, BA, 45662-900 Brazil. E-mail: svmatarazzo@uesc.br O trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência do sistema de resfriamento adiabático evaporativo, acionado em diferentes horários, em instalação do tipo freestall e seus reflexos sobre a ocorrência de mastite, produção e composição do leite e respostas hormonais de vacas em lactação. Foram utilizadas 28 vacas em lactação (70±10 dias), multíparas, das raças Holandesa Preta e Branca e Pardo Suíça, com produção média diária de 23±2,3 kg leite/dia. O período experimental de 56 dias teve início em 20 de janeiro de 2003. Os tratamentos foram: Controle (sem resfriamento); Dia (resfriamento 7 as 19 h); Noite (resfriamento 19 às 7 h) e 24 horas (resfriamento durante 24 h). A temperatura de bulbo seco (TBS), umidade relativa do ar (UR) e a temperatura de globo negro (TGN) foram mensuradas ao longo das 24 horas. A ordenha foi realizada às 7 h e 19 h. Amostragens semanais de leite e sangue foram realizadas para análise da composição do leite (gordura, proteína, lactose e contagem de células somáticas) e determinações hormonais de cortisol, tiroxina (T4) e triiodotironina (T3). Para avaliação da ocorrência de mastite clínica e subclínica foram feitos exames semanais de TAMIS (caneca de fundo preto) e California Mastitis Test (CMT). Foram colhidas amostras de leite de todos os quartos para identificação microbiológica dos agentes causais da mastite. O tratamento Dia diminuiu (P<0,05) a temperatura do freestall em 5,3°C às 12h e em 3,5°C às 14h em relação ao grupo Controle. A umidade relativa esteve elevada (P<0,05) às 7h no tratamento Noite e às 12h, 14h e 21h no tratamento Dia. Os maiores valores de ITU foram registrados no tratamento Noite às 12h, 14h e 21h. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos (P>0,05) para a produção e composição do leite. Nos animais do tratamento Os níveis de cortisol mostraram-se acima (P<0,05) dos níveis normais em todos os tratamentos. Já os teores de T3 e T4 estiveram dentro da faixa de normalidade. Na fase pré-experimental a maior frequência de isolamento bacteriano foi para Staphylococcus coagulase negativa. No tratamento noite e dia, houve uma diminuição na proporção de casos positivos de mastite subclínica da fase pré-experimental em relação à última semana da fase experimental. Na última semana da fase experimental houve uma diminuição de Staphylococcus coagulase negativa e aumento da ocorrência de Corynebacterium sp.

Abstract in English:

Data on the isolation of Corynebacterium bovis from a study realized in dairy herds from 17 municipalities in the Sta te of São Paulo, Brazil, are presented and discussed. The rnicrotsrganism was isolated from 954 (32.5%) of the 2935 samples examined. The percentage of isolation in the different municipalities varied from 0.0 to 73.6. Pure cultures were obtained from 28.2% of the quarters showing clinical mastitis and from 27.5% of those with sub-clinical mastitis as detected by the Califomia Mastitis Test (CMT) and modified Whiteside test. In addition to pure cultures, C. bovis was isolated together with Staphylococcus sp., Streptococcus sp., Pseudomonas sp., Enterobacteriaceae, Actinomycetales and others from 58.3% ofthe samples, predominantely fr_om quarters with mastitis. In outbreaks of C. bovis in three dairy herds, the microtsrganism was isolated from more than 70% of the samples, 78.8% of the isolations corning from quarters with clinical or sub-clinical mastitis.

• Corynebacterium bovis mastitis bovine São Paulo (State)

Abstract in Portuguese:

São apresentados e discutidos dados sobre o isolamento de Corynebacterium bovis no estudo realizado em propriedades de exploração leiteira, de 17 municípios do Estado de São Paulo, Brasil. Este microrganismo foi isolado de 954 das 2935 amostras examinadas (32,50%). A porcentagem de isolamento variou de 0,00% a 73,57% nos diferentes municípios. Foi obtido em cultura pura em 28,18% de quartos com mastite clínica e 27 ,45% daqueles com mastite sub-clínica (detectados pelas provas de CMT e Whiteside modificado). Além dos isolamentos em cultura pura, foi encontrado associado a outros microrganismos, como Staphylococcus sp., Streptococcus sp., Pseudomonas sp., Enterobacteriaceae, Actinomicetales e outros, em 58,27% das amostras, predominantemente de quartos com mastite. No presente trabalho são também relatados surtos por Corynebacterium bovis em três propriedades. Nestes surtos esse microrganismo foi isolado em mais de 70,00% das amostras, correspondendo 78,75% desses isolamentos a quartos com processos de mastite clínica e sub-clínica.

• Corynebacterium bovis mastite bovinos Estado de São Paulo

Abstract in English:

Antibiotic and chemotherapeutic drug sensitivity of 951 cultures of Staphylococcus sp., 590 cultures of Streptococcus sp. and 550 cultures of Corynebacterium sp., isolates of bovine mastites were studied. Staphylococcus sp. showed the highest levels of sensitivity (75-90%) to Cephalothin, Nitrofurantoin Vancomycin and Novobiocion: Complete resistance was seen against Phosphomycin, Polymyxin B, Colestin Sulphate and Rifamycin. In relation to Streptococcus sp., the most effective antibiotics were Chloramphenicol, Novobiocin and Vancomycin (72-77%). High levels of resistance (90-100%) were seen with Rifamycin, Streptomycin, Colestin Sulfate, Sulfomethoxazole, Phosphomycin and Polymyxin B. As for the cultures of Corynebacterium sp., the greatest sensitivity was seen with Cephalosporin (100%), followed by Erythromycin, Chloramphenicol, Gentamycin, Kanamycin, Tetracycline, Carbenicillin and Tobramycin (80-97%). None of the samples of Corynebacterium sp. studied showed complete resistance to any of the drugs tested.

• in vitro sensitivity antibiotics chemotherapeutic drugs mastitis cattle

Abstract in Portuguese:

Estudou-se in vitro a sensibilidade a antimicrobianos de 951 amostras de bactérias do gênero Staphylococcus, 590 amostras do gênero Streptococcus e 550 do gênero Corynebacterium, isoladas de mastites bovinas. Obtiveram-se os seguintes resultados em relação às bactérias do gênero Staphylococçus: os maiores índices de sensibilidade (75 a 90%) foram os observados frente à cefalosporina, nitrofurantoína, vancomicina e novobiocina. Observou-se 100% de resistência frente à fosfomicina, polimixina B, sulfato de colistina e rifamicina. Em relação a Streptococcus sp., os antimicrobianos mais efetivos foram cloranfenicol, novobiocina e vancomicina (sensibilidade de 72 a 77%). Altos índices de resistência (90 a 100%) foram observados frente à rifamicina, estreptomicina, sulfato de colistina, sulfametoxazol, fosfomicina e polimixina B. Quanto às amostras de Corynebacterium sp., a maior sensibilidade foi observada frente à cefalosporina (100%), seguida da eritromicina, cloranfenicol, gentamicina, canamicina, tetraciclina, carbenicilina e tobramicina (97 a 80%). Não foi observada resistência máxima (100%) aos antimicrobianos nas amostras de Corynebacterium sp. estudadas.

• Sensibilidade in vitro antimicrobianos mastite bovinos